细胞凋亡、坏死以及细胞活性检测产品的选择
来源:    发布时间: 2015-08-20 09:59   1277 次浏览   大小:  16px  14px  12px
相关事件及


相关事件及检测
1、细胞凋亡早期检测:
1)PS(磷脂酰丝氨酸)在细胞外膜上的检测(PS 外翻)
2)细胞内氧化还原状态改变的检测(谷光氨肽减少)
3)细胞色素C 的定位检测
4)线粒体膜电位变化的检测(膜电位下降)

2、细胞凋亡晚期检测:核酸内切酶在核小体之间剪切核 DNA,产生大量 DNA 片段
1) TUNEL(末端脱氧核苷酸转移酶介导的 dUTP 缺口末端标记)
2) LM-PCR Ladder(连接介导的 PCR 检测)
3) Telemerase Detection(端粒酶检测)
4)mRNA 水平的检测:荧光定量PCR技术检测fas, bax-alpha 和 bcl-X(长的)基因的 mRNA 表达水平来进行细胞凋亡的检测。

 
线粒体膜电位指示染料
 
线粒体膜电位的下降是细胞凋亡早期的一个标志性事件. 它在凋亡过程中与 caspase 活化同时发生并先于磷脂酰丝氨酸(PS)的外翻。基于以上研究,Biotium 研发了各种的新型的荧光探针用于测量线粒体膜电位。
 
MitoView633
MitoView™ 633 是一种新型的用于测量线粒体膜电位的深红染料(激发光/发射光622/648 nm)。
JC-1 线粒体膜电位检测试剂盒
JC-1 通常被用于检测细胞中线粒体膜电位的变化。在健康细胞中,JC-1以聚合体(J-aggregates),的形式存在在线粒体基质中,可以产生红色的荧光(激发光/发射光 585/590 nm)。相反,在正在凋亡或坏死的细胞中,JC-1 不能聚集在基质中,以单体的形式存在,从而发出绿色的荧光( 激发光/ 发射光510/527 nm)
Rhodamine 123
Rhodamine 123 是一种绿色荧光染料( 激发光/发射光505/534),广泛用作检测线粒体膜电位(流式细胞仪检测)。
TMRE 和TMRM 四甲基罗丹明乙脂或是甲基脂, 是穿膜型的红色荧光探针( 激发光/ 发射光548/573 nm),它们很容易被线粒体摄取。这些荧光探针常用于线粒体膜电位检测(流式细胞仪检测)。
DASPEI
DASPEI 是一种红色的线粒体膜电位荧光染料( 激发光/ 发射光461/589 nm ),被广泛用于高通量分析检测。
DiIC1(5)
DiI C1(5)是一种深红的羟花青染料(激发光/发射光 638/658 nm), 常被用于检测凋亡细胞中的线粒体膜电位。
 
MCB 谷光苷肽检测试剂盒
在细胞凋亡事件的早期,细胞质中谷胱甘肽(G SH)水平开始下降。细胞内 GSH 的排除非常活跃时,细胞液就由还原环境转为氧化环境,这可能导致了凋亡早期细胞线粒体膜电位的降低,从而使细胞色素C 从线粒体内转移到细胞液中,启动凋亡效应器 caspase 的级联反应。MCB(Monochlorobimane) ( 激发光/发射光380/461 nm)是一种荧光染料,在 GST 的作用下,它可以与谷胱甘肽结合并会发出蓝色荧光。可以通过荧光染料 monochlorobimane(MCB) 体外检测凋亡细胞细胞质中谷光苷肽的减少来检测凋亡早期细胞内氧化还原状态的变化。
 
NucViewTM488 Caspase-3 底物——可在活细胞中实时检测 caspase-3 活性

在凋亡早期的过程中,caspase-3 裂解对应的胞浆胞核底物,导致了细胞在形态上和生理生化功能上产生了一些列变化。NucView ™ 488 Caspase-3 底物是一种穿膜型的荧光标记的 caspase 底物,可在活细胞中实时检测 caspase-3 活性。            
传统的荧光 caspase 底物不能用于活细胞的 caspase 活力检测,因为其需要裂解细胞;其他的一些检测手段也仅仅只能检测在一个细胞群落中caspase的平均活力。基于荧光标记的caspase 抑制剂的检测技术(FLICA)可以进入活细胞检测 caspase 活力,但是荧光探针本身就是不可逆转的 caspase 抑制剂,所以无法在活细胞中实时检测 caspase 的活力。
NucView™ 488 Caspase-3 底物是 Biotium 公司研发的用于活细胞实时检测 caspase-3 活性的荧光探针,适用于荧光显微镜、流式细胞仪、荧光酶标仪。这种底物由一段大量带负电荷的DEVD 肽段与一种DNA 结合染料连接而成。这种底物最初不能结合 DNA,也不能产生荧光,这种底物可以穿过细胞膜进入细胞质,在这里被 Caspase-3 所剪切,从而释放出和 DNA 高亲和力的染料,释放出的染料迁移进入细胞核并将细胞核染成亮绿色。 ( 图 1、图 2)。

图 1. NucView™ 488 荧光底物检测 caspase 活性的原理

图2. 使用 Staurosporine 诱导 Jurkat 细胞凋亡后,使用 NucView™ 488(活细胞caspase3 检测) ( 绿色) 和 CF ™ 594Annexin V 染色( 红色)。
产品特性: 
•双功能: 允许研究人员在凋亡细胞内检查 caspase-3 的同时染色细胞核,显示在细胞核在凋亡过程中经历的形态学变化;
•不会影响 caspase-3 的活性, 可以实现实时检测 caspase-3;
•直接加入细胞培养液即可快速染色,无需清洗残余;
•可用甲醛固定, 兼容免疫染色;
•可使用荧光显微镜、流式细胞仪、荧光酶标仪进行检测;
•兼容贴壁细胞与悬浮细胞。
 
NucView488 Caspase-3 活细胞凋亡检测试剂盒
由储存在 DMSO 中的 NucVIEW™ 488 Caspase-3 底物与 caspase-3 抑制剂 Ac-DEVD-CHO 组成.
 
NucView488 Caspase-3 底物
分别以 1mM 浓度分别存储在 DMSO 或是 PBS 中的形式提供。DMSO 储存形式 NucView™ 488 Caspase-3 底物适用于一般类型的细胞, PBS 储存形式针对 DMSO 敏感型的细胞。
 
NucView488 Caspase-3 底物与CF594-Annexin V 双凋亡检测试剂盒
是一种双凋亡检测方法试剂盒,包括用来检测磷酸化丝氨酸(PS) 转位的深红色荧光探针CF594-annexin V 和Nucview 488 caspase-3 底物
 
NucView488 MitoView633 凋亡检测试剂盒
包括了深红荧光探针 MitoView™ 633 和 NucView™488 Caspase-3 底物,通过荧光显微镜或是流式细胞仪可同时检测线粒体膜电位与 caspase-3 活性。
 
Annexin V 偶联物
Annexin V 是一段 35-36 kDa 的磷脂结合蛋白,与磷脂酰丝氨酸有高度亲和力。细胞发生凋亡早期,膜磷脂酰丝氨酸(PS)由脂膜内侧翻向外侧,Annexin V 通过细胞外侧暴露的磷脂酰丝氨酸与凋亡早期细胞的胞膜结合。用荧光标记的 AnnexinⅤ作为荧光探针,利用流式细胞仪或荧光显微镜可检测细胞凋亡的发生。Biotium 提供了多种波段荧光标记的 annexin V 偶联物,其标记的荧光染料是 Biotium 独创的具有超高亮度以及光稳定性的 CF ™ 荧光探针,可适用于各种凋亡以及坏死细胞的检测分析。

图 1. Jurkat 细胞凋亡检测,NucView ™ 488 ( 绿色)与CF647-Annexin V ( 品红)染色。

Apoptosis and necrosis quantitation kits凋亡/ 坏死定量检测试剂盒)
我们的凋亡/ 坏死定量检测试剂盒包括了一对荧光探针:绿色的 CF 488A-Annexin V 和另一种非穿膜性的红色核酸结合染料(PI、7-AAD、EthD-III)。由于其不能穿透细胞膜,所以对于有完整细胞膜的凋亡早期细胞不能染色,而坏死细胞和凋亡晚期的细胞,其膜的完整性丧失,可以被染色。将其与 CF ™ 488A-Annexin V 匹配使用,可以将凋亡早期的细胞和晚期的细胞以及死细胞
区分开来。
Dual apoptosis assay kit双凋亡检测试剂盒)
我们的双凋亡检测试剂盒包括用来检测磷酸化丝氨酸(PS)转位的深红色荧光探针 CF594-annexin V 和检测 caspase-3 活性的 Nucview 488 caspase-3 底物。足够在流式细胞仪或荧光显微镜上进行至少 50 次实验。
 
凋亡与坏死定量检测试剂盒 
Apoptosis & Necrosis Quantitation Kit(凋亡/ 坏死定量检测试剂)
试剂盒包括了一对荧光探针:绿色的 CF ™ 488A-Annexin V 和另一种非穿膜性的核酸结合染料(如:PI、7-AAD、EthD-III)。由于其不能穿透细胞膜,所以对于有完整细胞膜的凋亡早期细胞不能染色,而坏死细胞和凋亡晚期的细胞,其膜的完整性丧失,可以被染色。将其与CF™ 488A-Annexin V 匹配使用,可以将凋亡早期的细胞和晚期的细胞以及死细胞区分开来。Biotium 独创的CF 488 荧光染料在亮度以及光稳定性上远超传统的绿色荧光染料。
 
CF488-Annexin V 和 7-AAD(7-氨基放线菌素D)凋亡检测试剂盒
适用于荧光显微镜的凋亡检测, 因为 7-AAD 在绿色荧光通道的溢出效应最小。而 CF™488-Annexin V 和 PropidiumIodide(PI,碘化丙啶)凋亡检测试剂盒推荐适用流式细胞仪.
 
Apoptosis & Necrosis Quantitation Kit Plus
包括 CF™488A-Annexin V 和 Ethidiumhomodimer III 荧光探针。EthidiumhomodimerIII,(EthD-III)1,2 是一种非穿膜性的核酸结合染料,这是由 Bioium 研发的新型探针,它和传统的Propidium iodide (PI:碘化丙啶)相比,具有更好的 DNA 亲和性以及更高的亮度。
 
The Apoptotic, Necrotic, and Healthy Cells Quantitation Kit
这个试剂盒除了 CF™ 488A-Annexin V 和 Ethidiumhomodimer III一对荧光探针,还包括了 Hoechst 33342, 这是一种穿膜性的蓝色DNA荧光染料(激发光/发射光350/461 nm),从而实现凋亡、坏死、健康细胞的定量检测。
 
Calcein-AM 活细胞检测试剂盒
可用于活细胞定量检测; 动物细胞存活率和细胞毒性检测试剂盒中含有 1 对探针:calcein-AM 和ethidiumhomodimerIII(EthD-3), 绿色荧光的 Calcein AM 基于胞内脂酶活性检测活细胞,而红色荧光 DNA 染料 EthD-3 基于膜完整性的破坏检测死细胞。

图 1. Staurosporine 诱导的 Jurkat 细胞 CF ™ 488A -Annexin V 探针 ( 绿色) 与 7-AAD 探针 ( 绿色)
 
dUTP 偶联物与 TUNEL 试剂盒
在细胞凋亡中, 染色体DNA 的断裂是一个重要的标志事件:凋亡细胞的 DNA 双链断裂或只要一条链上出现缺口会产生的一系列DNA 的3’-OH末端,可在脱氧核糖核苷酸末端转移酶(TdT)的作用下,将荧光素或是生物素标记的dUTP偶联物连接到断裂 DNA 的3’-OH 末端,可以通过流式细胞仪或是荧光显微镜检测到dUTP偶联物发出的荧光。这就是常说的TUNEL 法(TdT介导的dUTP缺口末端标记技术)的原理。
TUNEL 法凋亡检测是分子生物学与形态学相结合的研究方法,对完整的单个凋亡细胞核或凋亡小体进行原位染色,能准确的反应细胞凋亡最典型的生物化学和形态特征,可用于石蜡包埋组织切片、冰冻组织切片、培养的细胞和从组织中分离的细胞的细胞凋亡测定,并可检测出极少量的凋亡细胞,灵敏度远比一般的组织化学和生物化学测定法要高,因而在细胞凋亡的研究中已被广泛采用。
 
CF ™ 荧光标记 dUTP 偶联物
Biotium 提供各种波段的 CF™ 荧光染料标记 dUTP 偶联物,用作直标法 TUNEL 凋亡检测。我们的 CF™ 488A 和CF™ 594 TUNEL Assay ApoptosisDetection Kits 包括完整的反应缓冲液、用于TUNEL 标记的 TdT 酶,以及 Biotium 独创的具有超高亮度和光稳定性的绿色荧光 CF™ 488A 和深红色荧光 CF™ 594 偶联的 dUTP。整个实验操作过程,简便、快速,实验结果直观并且灵敏度高。
 
生物素标记的 dUTP 偶联物
Biotium提供数种不同连接臂长度的生物素-dUTP偶联物. 这些偶联物可用于TUNEL 法凋亡检测,可以使用荧光标记的链霉亲和素或是抗生物素的抗体进行显色分析。一般情况下,dUTP与生物素之间的连接臂长度越短,其与 DNA 的 3’-OH 末端的连接效率越高,之间的连接臂长度越长,生物素与链霉亲和素结合的效率越好。生物素与 dUTP 之间的数字表明其连接臂的长度,例如: biotin-11-dUTP 表示之间是 11 个原子的连接臂长度。

图 1. Jurkat细胞无处理(对照),1 uMstaurosporine诱导凋亡 3 小时,CF ™ 488 TUNELAssay Apoptosis Detection Kit 染色分析,使用 DAPI ( 蓝色) 共染色。
 
 
活性染料与凋亡诱导剂 
活性染料
Biotium独创的RedDot™ 2 非穿膜性的核酸结合染料,可以基于细胞膜完整性选择性的对细胞核进行染色。RedDot™ 2 也可以作为透性化细胞、固定细胞或组织切片的核酸复染剂。Ethidiumhomodimer III1,2(EthD- III)是一种非穿膜性的核酸结合染料,这是由 Bioium 研发的新型探针,它和传统的P ropidium iodide (PI:碘化丙啶)相比,具有更好的DNA 亲和性以及更
高的亮度。
Biotium提供多种的非穿膜性的核酸荧光染料,可基于细胞膜的完整性来标记细胞。包括 EthDIII、7-AAD 和 PI。我们也提供各种穿膜性活细胞染色的核酸荧光探针,包括深红的 RedDot™ 核酸染料, Hoechst 染料, 和 acridine orange(AO:丫啶橙), 这些染料与 ethidium bromide(EB)联合使用,可用作活细胞与死细胞的鉴定。
 
凋亡诱导剂
化学凋亡诱导剂在细胞凋亡的研究中有着广泛的应用。Staurosporine是一种非特异性的蛋白激酶抑制剂,能够诱导多种类型细胞凋亡。我们也提供ionomycin, 一种钙离子载体,它可以通过激活钙蛋白酶来诱导凋亡的发生。
 
活细胞定量检测 
Biotium公司提供数种用于细胞存活率和细胞毒性检验试剂盒,他们根据不同的原理检测细胞存活率和细胞毒性的不同方面。
 
Calcein-AM 活细胞定量检测试剂盒
Calcein-AM 是一种胞浆荧光标记物,本身无荧光。Calcein-AM 由于在 Calcein ( 钙黄绿素)的基础上加强了疏水性,因此能够轻易穿透活细胞膜。当其进入到细胞质后,酯酶会将其水解为Calcein( 钙黄绿素) 留在细胞内, 发出强绿色荧光。与其它同类试剂相比,Calcein-AM 是非常适合作为荧光探针去染活细胞的,因为 Calcein ( 钙黄绿素) 不会抑制任何的细胞功能如增殖或淋巴球的趋化性,所以它的细胞毒性很低。Calcein-AM 活细胞检测试剂盒可用于活细胞定量检测; 动物细胞存活率和细胞毒性检测试剂盒中含有1 对探针:calcein-AM 和ethidiumhomodimer III(EthD-3), 绿色荧光的 CalceinAM 基于胞内脂酶活性检测活细胞,而红色荧光 DNA 染料 EthD-3 基于膜完整性的破坏检测死细胞。
对于活的或死的细菌细胞的检测,请使用细菌细胞存活率和细胞毒性检测试剂盒(Cat#30027),它同样提供了两种荧光的染色。
 
Resazurin(刃天青), MTT, 与XTT 细胞活性检测试剂盒MTT, XTT, 和resazurin (又名:Alamar Blue®阿尔玛蓝) 都能被活细胞线粒体所代谢而产生荧光物质, 利用荧光或吸光度测量,可检测这种变化,从而检测细胞活性和定量活细胞数目。
 
MTT 、XTT 在活细胞中会被代谢成有色的 formazin 盐,可以利用酶标仪测量其吸光度(OD值)5,6。MTT 产生的是一种不溶性的 formazin 盐,所以在测量时需要裂解细胞,而 XTT 在测量时无需裂解细胞。
 
Resazurin( 刃天青又名:Alamar Blue®阿尔玛蓝 )是一种非荧光蓝色染料。加入培养液中,可作为氧分子电子传递链的受体,其代谢产物是一种粉红色荧光复合物(resorufin),呈现由蓝向红转变的颜色变化,可用光度计测定,也可用荧光检测。
 

图1. 用Calcein AM/Ethd-3 染色的Hela细胞。活细胞被染成绿色,死细胞被染成红色。
 
ATP-Glo™Bioluminometric Cell ViabilityAssay Kit
 
是通过定量存在的 ATP,确定培养物中活细胞数目的方法。其中ATP 是细胞代谢活性的指示剂。本试剂盒采用生物发光(bioluminescent)法,利用 Firefly luciferase(萤火虫荧光素酶)催化底物 D-Luciferin(荧光素)的转化,高效利用 ATP 的能量,发射出光子。发光信号与存在的ATP 量呈正比,而ATP 与存在于培养基中的细胞数目直接呈正比 8-10 ATP-Glo™ kit 最低可以检测到单个细胞或是 0.01 picomole的 ATP , 检测信号的线性范围可以达到 6 个数量级。  
ATP-Glo™ kit适用于单样品系统的 luminometer 荧光发光检测仪或是全自动 96 孔板 luminometer 荧光发光检测仪。