PMA™ and PMAxx™ Dyes and Ready-To-Us
来源:    发布时间: 2015-08-20 09:38   874 次浏览   大小:  16px  14px  12px
活力 PCR 检测

活力 PCR 检测死细菌中存在的活菌数-快速且专一
PMATM 及PMAxx™ 活力PCR可广泛用于以下领域:
食品安全
益生菌检测
环境测试
传染病测试
微生物研究



PMA™ 及 PMAxx™介绍
检测死细菌中存在的活菌数在许多应用中是至关重要的,包括食品安全,环境测试,传染病研究。传统使用细菌培养的检测方法,既费时又不灵敏。建立在PCR上的检测,是一个快速,专一,高度灵敏的替代方法。然而,普通 PCR 并不能区分活死细胞。由 Biotium 开发的新型 DNA 修饰染料-叠氮碘化丙锭 (PMA™) 克服了该难题,目前 Biotium 公司的科学家们研制出了一种更具有可选性的染料PMAxx™。
PMAxx™ 及 PMA™ 是高亲和性的光反应DNA结合染料。染料嵌入双链 DNA 暴露在强烈的可见光下形成共价连接。PMAxx™ 及 PMA™ 通过纯化时将被修饰DNA移除和通过 DNA 聚合酶抑制模板扩增来达到抑制被修饰 DNA 模板扩增的目的(见图 1)。
用 PMAxx™ 或 PMA™ 在PCR之前预处理菌样品可选择性地检测活菌,这一方法高度灵敏可靠。由于 PMAxx™ 及 PMA™ 是细胞膜不透性的,检测包括活、死细菌的样本时,只有死细菌由于细胞膜损坏,其 DNA 敏感的被修饰。实时定量PCR反应中,死细胞DNA扩增出现延迟,与活细胞相比有更高的 Ct 值(图 2)。PMA™-定量 PCR 技术不仅应用于细菌,还可以用于其他类型的细胞。









图 1 PMA™ 和 PMAxx™ 用于 qPCR 定量活菌的修饰原理 
细胞膜不透性的 PMA™ 和 PMAxx™  染料选择性共价修饰死细菌中的DNA,PMA™ 和 PMAxx™ 修饰的DNA模板的PCR扩增被抑制,从而实现了活细菌的定量
A                                     B
 
图 2 利用PMA™-qPCR检测活的及热灭活的大肠杆菌 
qPCR 所用引物对应16S rRNA 的一段。(A) 表示使用PMA™预处理的活、死大肠杆菌实时PCR定量分析示意图。 (B) 活、死大肠杆菌经PMA™处理和未经PMA™处理的 dCt。(dCt = Ct with PMA™  – Ct without PMA™)
PMA™ 的发明者开发的新的改良的活力PCR染料
自 2006 年 Biotium 研发出 PMA™ 以来,其被广泛用于不同的领域及在许许多多的的出版物中被引用。PMA™通过专一性扩增活细胞DNA改革了细菌检测的方法。
然而,条件不同和细胞类型的不同,有些经 PMA™ 处理后死细胞DNA失活不完全,造成结果出现假阳性。经过广泛的测试,Biotium 的科学家发明了 PMAxx™这一新染料。PMAxx™ 具有与PMA™相同的光谱性质,且在活力PCR区分活死细胞时 PMAxx™ 更有效。
对富有经验的 PMA™ 使用者来说,PMAxx™ 可用于现有的 PMA™-PCR 程序。由于PMAxx™的高活性,其使用浓度可降低。PMAxx™ 同样与 PMA-Lite™(见下)和适用于革兰氏阴性菌的 PMA™ 加强剂相容(见下页)。


图 3 PMAxx™ 通过活力PCR更好的区分活、死细菌
(A) 活的和经热灭活的枯草芽孢杆菌经 25 uM PMAxx,25 uM PMA,PMA-Lite™ 光解并提取DNA。Fast EvaGreen® qPCR Master Mix 用于扩增枯草芽孢杆菌 DNA 500-bp 片段。 PMAxx™处理的死细胞与PMA™处理的死细胞相比表现出有效的延迟(>7 Ct)。
(B) dCt = Ct with PMA™  – Ct without PMA™。ddCt= dCt (死细胞)- dCt(活细胞)。在测试的菌种中 PMAxx™ 都提高了活、死细菌的区分度。
PMA-Lite™ LED 光解仪
PMA-Lite™ 光解仪是针对 PMA™ 及其他类似染料设计的。订购 PMA-Lite™ LED 光解仪赠送一管 PMA™ 染料。 
产品特点:
一次可允许 18 管样品同时照明。
内风扇确保温度低于 37 ℃。
四种照明时间的选择 10, 15, 20 或 30 分钟。
LEDs 提供持续时间长的 465-475 nm 发射波可有效激活 PMA™,PMAxx™,EMA 或其他类似叠氮基染料。